做细胞转染后仅六个小时,发现培养皿整个的非常浑浊,肉眼看有点像有白色沉淀,镜下已经看不到细胞,非常污浊,看不清楚。请教这是什么东西啊,我估计是我的质粒污染了,如何去除质粒中的污染啊,转染之前我用乙醇沉淀过的。请大家帮忙,谢了!质粒污染就是蛋白质和RNA还有基因组DNA的污染。蛋白质污染可以用酚氯仿重新来抽提,RNA污染可以用RNA酶去除RNA,基因组 DNA污染可以在质粒抽提时注意点就可以避免了,不好去除基因组DNA,要么就胶回收来去除DNA.如果时手工法提的质粒,建议换试剂盒来提,这些都可以避免的。1.估计培养皿的"浑浊"现象是细菌.
2.如果是质粒污染的话,电泳就能检测出来.
3.把你提取的质粒过柱子就可以啦.混浊是细菌污染,菌长的多的时候摇晃一下培养皿,会看到类似白烟的东西,镜下一看都是细菌。
一般质粒提取最后的时候注意一下,用灭菌水和无菌的EP管,管口过火,质粒提取后如果要检样,用无菌枪头。转染完成之后,换培养液的时候要加双抗的培养液。
注意这些一般不会有问题。